資材のウイルスに対する効果を確認するために実施した。

試験実施施設
株式会社食環境衛生研究所

試験日程概要
試験開始日：2020年5月14日
試験終了日：2020年7月20日

供試ウイルス
株式会社食環境衛生研究所にて保有している 1 ウイルス種を試験に供試した。
Porcine epidemic diarrhea virus P-5V 株 （以下、PEDV）
※豚感染性のコロナウイルス（新型コロナウイルス代替として）
培養細胞：vero 細胞（アフリカミドリザルの腎臓上皮由来株化細胞）

試験資材
次亜塩素酸水
商品名①：さくら不動産（Technical Fine Co.,Ltd　ナノエイト（nano eight）100ppm タイプ
商品名②：ユニトライク株式会社　G ミスト 100ppm タイプ
※試験資材は原液を使用した。

区	検体	検査時点（分）	反復数
			ウイルス
対照	滅菌リン酸緩衝液	0、1	1
試験	試験資材	1	1

ウイルス液調製方法
1) PEDV を vero 細胞に接種した。
2) 37 ℃で 1 時間吸着後、接種ウイルス液を除去し、滅菌 PBS で 2 回洗浄した。
3) MEM 培地を加え、37 ℃、5 ％CO₂下で培養した。
4) 70～80 ％程度の細胞変性効果（以下、CPE）が観察された時点で、培養上清を回収した。
5) 回収した培養上清を、3000 rpm で 30 分間遠心後、遠心上清を分注し、-70 ℃以下で保存したものを供試ウイルス液とした。

試験手順及び方法
(1) ウイルス液の接種及びウイルス力価測定
試験実施前に、資材を 10 倍段階希釈後、vero 細胞に接種し、37 ℃、5 ％CO₂ 下で 5 日間培養した。vero 細胞が正常な形状を示さなかった場合、資材による細胞毒性有りと判定し、本試験では細胞毒性が確認された希釈倍率を試験から除外した。
その結果、試験資材原液で細胞毒性がみられなかったため、本試験における検出限界は 10^1.5 TCID₅₀ / mL とした。

① 検体 1 mL を試験管内に用意した。
② 検体の中に PEDV 液を 0.1 mL 接種した。なお、接種直後はボルテックスミキサーにより 1 秒間攪拌を行い、その後検体は 25℃で静置した。
③ 対照区は、接種後 0 分（直後）及び 1 分の時点において、検体を試験管から採取して別の容器に分注し、MEM 培地で 10 倍段階希釈した。
④ 試験区は、接種後 1 分の時点において、検体を試験管から採取して別の容器に分注し、MEM 培地で 10 倍段階希釈した。
⑤ 希釈液を vero 細胞に接種後、37 ℃、5 ％CO₂ 下で 5 日間培養した。
⑥ CPE の有無から、ウイルス感染価（TCID50）を測定した。

評価
試験結果において、検査時点ごとに、対照区に対する試験区の減少率（%）を算出し、効果を確認した。

なお、本試験において減少率は以下の式で算出した。

結果

結果を表 1 及び図 1 に示した。
対照区のウイルス感染価は試験開始時から終了時まで 10 ^8.1 TCID₅₀ / mL であ った。
試験区のウイルス感染価について、接種後 1 分で＜10 ^1.5 TCID₅₀ / mL（検出限界未満：99.9999％以上減少）であった。

考察
本試験は、試験資材の PED ウイルスに対する効果を確認するために実施した。
試験の結果、PED ウイルスに 1 分間以上接触させることで、顕著なウイルス減少効果がみられることが判明した。

※本試験結果は試料として切り出した一部のものであり、荷口全体の品質を保証するものではありません。
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